Популярное

Мифы о звукоизоляции



Как построить дом из пеноблоков



Как построить лестницы на садовом участке



Подбираем краску для ремонта



Каркасные дома из дерева


Главная » Состояние слизеобразующей функции

Состояние слизеобразующей функции желудка с определением антирадикальной и антиоксидантной

активности желудочной слизи и плазмы крови у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori

Павленко О.А., Самойлова А.В.(81а9т4о7@уап(Сех.ги), Кривова Н.А., Заева О.Б.

Сибирский государственный медицинский университет МЗ РФ, Томск

При анализе биохимического состава нативной слизи желудка, антирадикальной и антиоксидантной активности нативной слизи желудка и плазмы крови у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, полученные показатели резко отличаются от таковых у здоровых лиц за счет секреции незрелых гликопротеинов и снижения антиоксидантной и антирадикальной неферментативной активности. Несмотря на высокую эффективность антисекреторной и эрадика-ционной терапии с рубцеванием язвенного дефекта в желудке, не произошло нормализации биохимического состава надэпителиального слизистого слоя. Не было установлено положительных сдвигов и в состоянии антирадикальной и антиоксидантной защитной функции нативной слизи и плазмы крови у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori после проведенного лечения.

Ключевые слова: язвенная болезнь, Helicobacter pylori, желудочная слизь

Местные нарушения в желудке, вызывающие язвообразование, стали предметом многочисленных исследований последнего десятилетия, приведших к несомненным достижениям в лечении язвенной болезни желудка. Одним из главных местных защитных факторов в желудке является слизь - гель, тесно соприкасающийся с подлежащими эпителиальными клетками. Способность противостоять кислотно-пептическому воздействию у геля выше, чем у самих клеток, что определяет его важное физиологическое значение[11]. При язвенной болезни может снижаться общая продукция слизи или меняться качественный её состав[5]. Так, по мнению П.Д.Рабиновича (1984), причиной развития язвенной болезни являются генетически детерминированные особенности гликопротеинов, затрудняющие их секрецию. Инвазия Helicobacter pylori, преимущественно захватывающая антральный отдел, но способная распространяться и на тело желудка, очевидно, снижает сопротивляемость слизистой к повреждающему действию соляной кислоты и пепсина[11]. Helicobacter pylori активизирует систему комплемента, вызывая комплементозависи-мое воспаление, и иммунокомпетентные клетки, лизосомальные ферменты которых повреждают эпителиоциты слизистой оболочки желудка, и способствуют тем самым протеолитическому прорыву слизистой с усиленной ретродиффузией Н+ - ионов.

Слизь служит первым барьером против проникновения в организм бактерий [3], в то числе и Helicobacter pylori, защищает от контакта с грубыми частицами пищи в желудке. Все это чисто механические функции, и для их обеспечения не потребовалось бы такого сложного строения муцинов[3]. Защитные свойства слизистого слоя проявляются не только в механической и химической защите подлежащего эпителия. Так, в 1998г впервые была показана очень высокая антирадикальная неферментатив-



ная активность слизистого слоя, по- видимому, благодаря большому числу свободных радикалов на моносахаридных остатках. Этот факт имеет важное значение с точки зрения защиты целого организма от свободных радикалов, которые могут попадать в пищеварительный тракт с пищей и воздухом[8,7].Окислительно-восстановительные процессы в организме составляют важную часть любого звена метаболизма и необходимы как для обеспечения энергетических потребностей, так и для доставки и утилизации кислорода в тканях [4]. В нормально функционирующих клетках содержание продуктов свободнорадикального окисления находится на крайне низком уровне. Это свидетельствует о достаточно мощной антиоксидантной защитной системе. По данным С.Г.Ванштейна с соавт. (1984), Ф.А.Звершхановского с соавт. (1987), у больных с язвой желудка отмечается инициация ПОЛ (перекисного окисления липидов), связанная со снижением антиоксидантной активности сыворотки крови вследствие перераспределения антиоксидантов в организме, нарушения их всасывания, повышенного расхода в очаге поражения. Помимо исследования процессов антирадикальной и антиоксидантной защиты крови представляет значительный интерес изучение состояния данных систем в слизистой оболочке желудка (СОЖ). По данным В.Д.Пасечникова и др. (1998), обнаруживается увеличение активности супероксиддисмутазы в клетках слизистой оболочки у больных язвенной болезнью желудка. Значительная активация процессов ПОЛ у больных язвенной болезнью желудка найдена [5] не только в сыворотке крови, но и непосредственно в зоне формирования морфологического субстрата (в данном случае язвы). При язвенной болезни желудка энергообеспечение СОЖ существенно понижено в связи со структурными нарушениями митохондрий, снижением активности их дыхательных ферментов, понижении энергетического уровня адениловой системы. Выраженные нарушения в энергообразующих системах обуславливают значительное превалирование в СОЖ катаболических процесоов над анаболическими, что приводит к нарушению целостности мембран, проницаемости, микроциркуляции, и снижению в конечном итоге резистентности СОЖ [6]. При патологических изменениях желудка происходит накопление активных форм кислорода вследствии повреждения мито-хондриальных структур и нарушении использования кислорода в цепи тканевого дыхания, индуцирование ПОЛ компонентов мембран и играет существенную роль в патогенезе изъязвлений в желудке [5]. Уровень свободнорадикальных и электрофиль-ных повреждений внутриклеточных структур и. в часности, ДНК в клетках СОЖ, контролируется, по-видимому, не только системой внутриклеточных антиоксидан-тов, но и внеклеточными механизмами. Реализация влияния антиоксидантной системы организма на клетки СОЖ возможна через кровь, желудочный сок, желудочную слизь и другие биологические жидкости. Доступность таких биологических жидкостей, как плазма крови и желудочная слизь, для биохимического исследования и присутствие в них основных антиоксидантов делают возможным изучение их анти-оксидантных и антирадикальных характеристик у больных с язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori [1,2].

Материалы и методы. Обследовано 68 больных, в возрасте от 20 до 52 лет, язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, в стадии обострения. Из них 35 мужчин (51,4 %) и 33 женщины(48,5 %). Локализация язвы в ан-тральном отделе и теле желудка, размеры язвенного дефекта от 0,5 до 1,5 см в диаметре. Течение язвенной болезни желудка у всех было средней степени тяжести. Продолжительность заболевания колебалась от нескольких месяцев до 33 лет. Во время эзофагогастродуоденоскопии проводилась прицельная биопсия с гистологическим исследованием фундального и антрального отделов желудка для определения степени обсеменения Helicobacter pylori при окраске по Гимзе по методу Л.И.Аруина(1990), а также экспресс-диагностика - уреазный тест до лечения, через



1,5 месяца и через 6 месяцев после лечения. Эрадикационная терапия язвенной болезни желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, проводилась в течении 7 дней по тройной схеме, рекомендуемой Маастрихским соглашением - 2(2000г): ингибитор протонной помпы - ультоп(омепразол) по 20 мг 2 раза в сутки натощак , фроми-лид (кларитромицин) 500мг 2 раза в сутки и хиконцил (амоксициллин) 1000мг 2 раза в сутки после еды. В дальнейшем больные язвенной болезнью желудка получали антисекреторный препарат ультоп (омепразол) по 40 мг в сутки до полного рубцевания язвы.

Всем больным проводилось фракционное исследование желудочной секреции в обе фазы пищеварения с применением субмаксимальной стимуляции гистамином (0,008 мг на 1 кг веса). Определялись следующие показатели: часовое напряжение базальной и стимулированной секреции, базальная кислотная продукция (БКП), субмаксимальная кислотная продукция (СКП).

Для анализа биохимического состава нативной слизи использовались аспираты желудочного секрета до лечения 68 образцов и после проведения эрадикационной терапии через 1,5 месяца 68 образцов. Выделение полимеризованных гликопротеи-нов проводилось по методу, предложенному Б. В. Питраном (1990). Для определения концентрации белковой части гликопротеинов использовался метод, основанный на осаждении белков амидо-черным с последующим измерением оптической плотности надосадочной жидкости (Г.А.Барзун и соавт, 1982). Для определения углеводного состава проводили ступенчатый кислотный гидролиз по методу А.Нойбергера и Р. Д. Маршалла (1969). В полученных гидрализатах определяли концентрацию гексо-заминов методом G.Blix (1948), галактозы методом D.U.Handel, W.Kittlak(1963) и фукозы методом Z.Dieche, L.B.Shettles(1948). Для определения концентрации аце-тилнейраминовой (сиаловой) кислоты использовался метод L.Warren(1959). Для характеристики состава структурных гликопротеинов рассчитывали суммарную концентрацию всех моносахаров и ее отношение на мг белка, что позволяет определить степень гликозилирования гликопротеинов. Для характеристики строения олигоса-харидных цепочек рассчитывали парциальный состав отдельных моносахаров - процентное соотношение того или иного моносахара в общей сумме моносахаров. В го-могенате, содержащем внеструктурные компоненты желудочной слизи, определяли концентрацию белковых веществ, нуклеиновых кислот по методу Г.А.Критского, С.В. Александрова (1980), активность пепсина (А.М.Уголев с соавт., 1969). В качестве группы контроля изучали биохимические показатели нативной слизи желудка у 10 здоровых лиц.

Для определения антиоксидантной и антирадикальной активности проводилось исследование сыворотки крови и аспиратов нативной слизи желудка 68 образцов до лечения и 68 образцов после проведения эрадикационной терапии через 1,5 месяца. В работе использовали хемилюминометрический метод определения АОА и АРА, описанный E.Lissi и соавт.(1992), в модификации Н.А.Кривовой с соавт.(1992). В качестве группы контпроля изучали показатели АОА и АРА сыворотки крови и слизи желудка у 10 здоровых лиц.

Статистическая обработка результатов производилась с помощью пакета прикладных программ Statistica 5.5 . Достоверность различий в группах оценивалась с использованием непараметрических критерия Вилкоксона и критерия Манна-Уитни[10]. Проводился расчет основных статистических характеристик и корреляционный анализ полученных данных. Результаты исследования.

Проведенный анализ биосинтеза нативной слизи желудка показал, что у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, до лечения наблюдаются значительные изменения в биосинтезе гликопротеинов пристеночного



слизистого слоя по сравнению с результатами у здоровых людей. Несмотря на то, что общая сумма моносахаров в гликопротеинах нативной слизи у больных язвенной болезнью желудка с локализацией язвы в теле и антральном отделе (45,46±2,41мкМ/мл и 39,17±2,24мкМ/мл) по сравнению с данными у условно здоровых лиц (40,41±1,16мкМ/мл) не имеет достоверных различий (Р>0,05), в составе моносахаров у больных язвенной болезнью желудка с локализацией язвы в фундаль-ном или антральном отделе желудка по сравнению с условно здоровыми лицами наблюдаются следующие изменения: снижается уровень гексозаминов в 6 раз (Р<0,01), повышается содержание галактозы в 2,7 и в 2,1 раза (Р<0,01), фукозы в 2,3 и в 2,8 раза (Р<0,01), N-ацетилнейраминовой кислоты в 1,8 раза (Р<0,05). Уровень белка снижается в 1,6 и в 2 раза по сравнению с нормой (Р<0,01) (табл.1).

Таблица 1

Биохимический состав полимеризованных гликопротеинов и внеструктурных компонентов желудочной слизи у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori

Показа-

Больные

Больные

Больные

Больные

трольная

ЯБЖ

ЯБЖ

ЯБЖ

ЯБЖ

в фундаль-

в фундаль-

в антральном

в антраль-

n = 10

ном

ном

ном

(до лечения)

(до лечения)

(после лече-

n = 32

(после ле-

n = 36

ния) n = 36

чения)

n =32

Гексоза-

ммоль/л

25,50

(23,40;26,8

4,32 (4,13;4,66)*

4,39 (4,13;4,66)*

4,26 (3,97;4,53)*

4,43 (3,75;4,77)*

Галактоза

12,95

40,47

37,01

20,82

23,87

ммоль/л

(12,00;13,9

(17,96;45,82)

(20,53;37,86)

(19,02;40,10)

(18,82;39,4

Фукоза ммоль/л

2,58 (1,99;3,17)

7,43 (3,05;7,91)*

8,01 (7,36;8,31)*

7,69 (6,73;9,02)*

6,13 (3,09;7,66)*

Сиаловая

кислота

ммоль/л

0,14

(0,13;0,14

0,24 (0,10;0,28)*

0,24 (0,22;0,29)*

0,26 (0,21;0,35)*

0,23

(0,20;0,26)

Суммар-

ная концентрация моносаха-

40,41

(38,22;42,6

50,03 (29,43;59,53)

49,58 (29,58;49,80)

31,47 (29,41;54,43)

34,26

(27,84;50,7

ров

Белок мг/мл

2,90

(2,60;3,20

1,76 (1,13;2,51)*

1,97 (1,74;2,01)*

1,34 (1,10;1,59)*

1,50 (1,06;1,88)*

Нуклеино-

0,31

(0,28;0,34

вые кисло-

0,86

0,49

0,83

0,62

(0,62;1,48)*

(0,49;0,99)*

(0,56;0,85)*

(0,46;1,11)*

Пепсин мЕд/мл

2,23

(2,11;2,35 )

1,29 (1,20;1,57)*

1,77 (1,27;1,81)*

1,40 (1,03;1,83)*

1,66 (1,38;2,24)*



Примечание: данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей Ме (25;75); * - различия при сравнении с группой контроля статистически высокозначимы (р<0,01).

Подобного типа нарушения биосинтеза гликопротеинов связаны с секрецией незрелых гликопротеинов, т.е. гликопротеинов с низким содержанием гексозами-нов - корпусных моносахаров, обеспечивающих присоединение олигосахаридной цепочки к полипептидному корпусу[9]. Незрелые гликопротеины не обеспечивают адекватный уровень физико - химических свойств гликопротеинового геля, покрывающего люменальную поверхность слизистой оболочки, что способствует её повреждению агрессивными факторами полости. Это подтвержается и нашими данными об увеличении скорости слущивания эпителиальных клеток - увеличивается выход в полость нуклеиновых кислот - маркеров клеточного распада в 2,8 раза при локализации язвы в теле желудка и в 2,7 раза при локализации язвы в антральном отделе желудка по сравнению с условно здоровыми людьми (Р<0,01). При этом в 1,5 раза (Р<0,01) снижается содержание в нативной слизи протеолитического фермента -пепсина, который сорбируется на поверхности слизистого слоя. Это свидетельствует о том, что слизистый слой у больных язвенной болезнью деградирует быстрее, чем у здоровых людей (табл.1).

Сравнивая показатели желудочной секреции, полученные у больных с локализацией язвы в теле желудка с соответствующими показателями у больных с локализацией язвы в антральном отделе можно отметить, что объём желудочного сока был в пределах нормы в базальную фазу секреции (61,31±4,78мл/ч и 79,9±6,0мл/ч) и выше нормы в стимулированную фазу (175,31±9,74ммоль/л и 180,8±9,88ммоль/л). Что же касается кислотной продукции, то повышение её уровня выше нормы отмечается в обеих группах, как в базальную, так и в стимулированную фазы секреции. При локализации язвы в антральном отделе желудка показатели максимальной концентрации свободной и общей соляной кислоты и дебита общей соляной кислоты повышены в 1,7 раза по сравнению с соответствующими показателями у больных с локализацией язвы в теле желудка в обе фазы секреции (Р<0,001) .

Антиоксидантную активность (АОА) желудочной слизи и плазмы крови у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, определяли с использованием дифенилпикрилгидразила, как донора супероксиданиона. Фитонцидная фракция в тех же условиях является донором суммы свободных радикалов, поэтому её использование позволяет определить антирадикальную активность (АРА) желудочной слизи и плазмы крови. При анализе показателей АОА и АРА в надэпителиальном слизистом слое у больных язвенной болезнью желудка с локализацией язвы в теле и антральном отделе желудка до лечения в сравнении с группой здоровых лиц (табл.2) выявлено повышение этих показателей у больных в 2 раза (Р<0,01), а в плазме крови - снижение этих показателей в 1,5 раза (Р<0,01). Через 1,5 месяца после эрадикационной терапии и рубцевания язвы показатели АОА и АРА слизи и плазмы крови у пациентов оставались на прежнем уровне. Взаимосвязь АОА и АРА желудочного секрета с составом гликопротеинов слизи может быть определена тем, что гликопротеины со сниженным содержанием гексозаминов не обеспечивают адекватного уровня прочности олигосахаридных цепочек, которые легко деградируют у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, по сравнению со здоровыми лицами. Весьма показательно и то, что высокий уровень АОА и АРА желудочного секрета имеет обратную корреляцию с низким уровнем АОА и АРА плазмы крови, что может свидетельствовать о системном нарушении антиоксидантной защиты у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori.



Эффективность проводимой комбинированной терапии оказалось высокой. Рубцевание язвы в теле желудка наступило на 21 день у 60 больных (88,2%), и только у 8 больных (11,8%) , с локализацией язвы в антральном отделе желудка рубцевание язвы наблюдалось на 40 день лечения. Эрадикация Helicobacter pylori через 1,5 месяца наблюдалась у 88,8% больных, а у 11,2% сохранялось слабое обсеменение в пи-лороантральном отделе желудка. Через 6 месяцев после лечения эрадикация Helico-bacter pylori наблюдалась у 80% больных, а у 20 % сохранялось слабое и умеренное обсеменение в антральном и фундальном отделе желудка. При 12 месячном наблюдении 61 больных (89,7%) находились в ремиссии, отсроченные рецидивы язвенной болезни желудка наблюдались у 7 больных (10,3%) с персистенцией инфекции.

Таблица 2

Показатели АОА иАРА желудочной слизи и плазмы крови у больных

язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori

Показа-

Контрольная

Больные

Больные

Больные

Больные

ЯБЖ в

ЯБЖ в

ЯБЖ в

ЯБЖ в

(здоровые

фунд.отд.

фунд.отд.

антр. отд.

антр. отд.

доноры)

(до леч)

(после леч)

(до леч)

(после леч)

n = 10

n = 32

n = 32

n = 30

n =30

АОА

6,09

11,96

11,60

12,75

10,7

(ДРРН)

(6,92;5,33)

(9,8;14,6)*

(10,3;15,10)*

(9,95;14,55)

(9,75;11,35)*

слизи 10

у. е. мл / сек

АРА

509,77

977,67

907,0

991,5

982,5

(фитон-

(581,33;439,48)

(941,0;1075

(891,0;1103,0

(847,0;1067,5)

(916,0;1018,5

фракция)

слизи

10 у.е. мл/ сек

АОА

60,50

45,66

46,1

51,2

48,94

(ДРРН)

(58,50;62,00)

(39,1;54,4)*

(42,7;52,5)*

(50,3;51,6)*

(47,92;50,4)*

крови

10 у.е. мл/сек

АРА

4578,0

2855,33

3455,0

2813,0

2659,6

(фитон-

(4482,0;4674,0)

(2440,0;

(2061,0;

(2520,0;

(2522,0;

3351,0)*

4060,0)*

3207,0)*

2693,8)*

фракция)

крови

10 у.е. мл/ сек

Примечание: данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей Ме (25;75); * - различия при сравнении с группой контроля статистически высокозначимы (р<0,01).



Несмотря на положительную динамику в течении язвенной болезни желудка с полным рубцеванием язвенного дефекта после эрадикационной терапии через 1,5 месяца не произошло существенных изменений в биосинтезе гликопротеинов слизи желудка. После лечения сохранились все установленные ранее нарушения в составе моносахаров: снижение концентрации гексозаминов, увеличение концентрации галактозы, фукозы и ацетилнейраминовой кислоты, низкое содержание белка и пепсина, сорбированного на нативной слизи. Отмечено также увеличенное содержание нуклеиновых кислот в нативной слизи по сравнению со здоровыми лицами. Не было установлено положительных сдвигов и в состоянии антиоксидантной и антирадикальной защитной функции нативной слизи у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, после проведенного лечения.

Таким образом, биохимический состав, антиоксидантная и антирадикальная активность нативной слизи желудка у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, резко отличается от таковых у здороых лиц за счет секреции незрелых гликопротеинов и снижения антиоксидантной и антирадикальной неферментативной активности, вызывающих нарушение защитной функции пристеночного слизистого слоя желудка. Несмотря на эффективную антисекреторную и эрадикационную терапию с рубцеванием язвенного дефекта не произошло нормализации биохимического состава пристеночного слизистого слоя, что вызывает снижение защитного слизистого барьера у больных язвенной болезнью желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori, и может быть основанием для рецидивирования язвенного процесса в дальнейшем.

Литература

1. Бочкарёва Н. В. Антиоксиданты при различной морфологической перестройке слизистой оболочки желудка / Н.В.Бочкарёва, Л.А.Коломиец, И.В.Кондакова и др. Сибир. Журн. Гастроэнтерологии и гепатологии. - 1998. - Т. 1, №6-7. - С. 317 -

318.

2.Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анионрадикала и суперок-сиддисмутазы в тканях организма / Е.Е.Дубинина Успехи современной биологии. -1989. - Т. 108, №1 (4). - С. 3 - 8.

3.Железная Л. А. Структура и функции гликопротеинов слизи (муци-нов)./Л.А.Железная Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрок-тологии.-1998. №1. - С.30-37.

4.Зборовская И.А. Антиоксидантная система организма, её значение в метаболизме: Клинические аспекты / И.А. Зборовская, М.В.Банникова Вестник РАМН. -1995. - №6. - С.53 - 60.

5.Карпов А.Б., Кривова Н.А., Павлова Н. Патогенез рака желудка: клинические и биохимические аспекты. Тюмень, 2003. - С.172.

6.Карпов А.Б. Роль биоантиоксидантов в коррекции предраковых изменений слизистой желудка / А.Б.Карпов, Л. А.Коломиец Актуальные вопросы гастроэнтерологии. - Томск, 1993. - С. 83.

7.Кривова Н.А., Селиванова Т.И., Лаптева Т.А. Структурно-функциональная организация защитного слизистого барьера пищеварительного тракта. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.-1996.-№3.-С.21-25.

8.Кривова Н.А., Заева О.Б. Антирадикальная неферментативная активность пристеночного слизистого слоя пищеварительного тракта Механизмы функционирования висцеральных систем: Тез.докл.межд.конф.посвященной 75-летию со дня рождения А.М.Уголева, Санкт-Петербург.-2001.-С.196.

9.Кривова Н.А., ДамбаевГ.Ц., Хитрихеев В.Е. Надэптелиальный слизистый слой желудочно-кишечного тракта и его функциональное значение. - Томск, 2002. - 31 с.



10.Лабезник Л.Б., Васильев Ю.В. Стандарты Диагностики и терапии кислотоза-висимых заболеваний, в том числе и ассоциированных с Helicobacter pylori Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2004. - №2. - С.5-12.

11.Рысс Е.С., Звартау Э. Э. Фармакотерапия язвенной болезни. - Москва,1998.-С.17-18.



© 2017 РубинГудс.
Копирование запрещено.